فرمولاسیون ساخت امولسیون لیمو مخصوص آبلیمو

طرز ساخت کلودیفایر(ابری کننده)

فرمول تولید آبلیمو صنعتی

آموزش ساخت امولسیون لیمو ترش

 

 

اسانس لیمو مرکبات: ترکیب شیمیایی، فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد میکروبی با اثر نگهدارنده آن در برابر لیستریا مونوسیتوژنز تلقیح شده در گوشت چرخ کرده گاو

زمینه

لیمو ( Citrus limon ) گیاهی روان و از خانواده Rutaceae است . گیاهان مرکبات یکی از منابع با ارزش اصلی اسانس مورد استفاده در غذاها و اهداف دارویی هستند.

مواد و روش ها

در این مطالعه، ما ترکیب شیمیایی، فعالیت های آنتی اکسیدانی و ضد میکروبی اسانس C. limon ( C EO) را با اثر نگهدارنده آن در برابر لیستریا مونوسیتوژنز تلقیح شده در گوشت چرخ کرده بررسی کردیم. کروماتوگرافی گازی / طیف سنجی جرمی (GC-MS) برای شناسایی اجزای اصلی کلر EO به دست آمده استفاده شد. فعالیت های آنتی اکسیدانی این کلر EO با توجه به روش سفید کننده بتا کاروتن، و همچنین با فعالیت مهار رادیکال 2.2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) تعیین شد. برای فعالیت ضد میکروبی، از روش انتشار چاه آگار استفاده شد و حداقل غلظت مهارکننده (MICs) و همچنین حداقل غلظت قارچ کش (MFCs) تعیین شد. اثر در محل کلر EO از طریق پارامترهای فیزیکوشیمیایی (pH و مواد واکنش دهنده اسید تیوباربیتوریک (TBARS)، و همچنین در برابر L. monocytogenes در مدل گوشت چرخ کرده مورد بررسی قرار گرفت.

نتایج

21 جزء در کلر EO شناسایی شد و دو ترکیب غالب لیمونن (74/39 درصد) و بتا پینن (44/25 درصد) بودند. این کلر EO توانایی مهار DPPH عالی با غلظت عصاره ارائه 50% مهار (IC ₅₀ ) 15.056 میکروگرم بر میلی لیتر و مهار سفید کننده قوی β-کاروتن را پس از 120 دقیقه انکوباسیون با IC ₅₀ 40.147 میکروگرم در میلی لیتر نشان داد. MIC ها از 0.039 تا 1.25 mg/ml برای باکتری های گرم مثبت و از 0.25 تا 2.5 mg/ml برای باکتری های گرم منفی متغیر بود. پتانسیل حفظ گوشت کلر EO در برابر L. monocytogenes مورد بررسی قرار گرفت . Cl EO با موفقیت توسعه L. monocytogenes را در گوشت چرخ کرده گاو مهار کرد. استفاده از کلر EO در مقادیر 0.06 و 0.312 میلی گرم بر گرم، ممکن است فرصت های امیدوارکننده جدیدی را برای جلوگیری از آلودگی و رشد باکتری های بیماری زا، به ویژه L. monocytogenes ، در طول نگهداری گوشت چرخ کرده گاو در دمای 4 درجه سانتی گراد باز کند. علاوه بر این، در طول دوره نگهداری، مقادیر فیزیکوشیمیایی (pH و TBARS) در گوشت شاهد بیشتر از گوشت تیمار شده با کلر EO بود که نشان دهنده فعالیت آنتی اکسیدانی کارآمد کلر EO است.

نتیجه

پیشنهاد شد که کلر EO ممکن است یک منبع بالقوه جدید به عنوان عوامل ضد میکروبی و آنتی اکسیدانی طبیعی باشد که در سیستم های غذایی و صنعت داروسازی استفاده می شود.

مرکبات با تولید 240780 میلیون تن در سال 2013 مهمترین محصولات زراعی جهان از نظر تولید هستند . گیاهان مرکبات در بسیاری از کشورهای جهان رشد می کنند و یکی از کشورهای عمده تولید کننده مرکبات آفریقایی تونس است. بنابراین، مرکبات به عنوان یکی از مهم ترین محصولات زراعی در تونس از نظر اقتصادی در نظر گرفته می شود. جنس Citrus متعلق به خانواده Rutaceae است که از حدود 140 جنس و 1300 گونه تشکیل شده است و به عنوان مثال Citrus limon (لیمو) از گونه های مهم جنس Citrus است [ 2 ]. اسانس ها از بسیاری از محصولات طبیعی با ارزش تشکیل شده بودند که می توان آنها را مخلوطی از هیدروکربن ها، ترکیبات اکسیژن دار و باقیمانده های غیرفرار توصیف کرد. آنها عبارتند از ترپن ها، سسکوی ترپن ها، آلدئیدها، الکل ها، استرها و استرول ها [ 3 ]. گیاهان مرکبات یکی از منابع اصلی اسانس را تشکیل می دهند که به طور گسترده برای کاربردهای بالقوه آنها در صنایع غذایی مورد مطالعه قرار گرفته است [ 4 ].

غذاهای آلوده به لیستریا مونوسیتوژنز، استافیلوکوکوس اورئوس، اشریشیا کلی O157:H7 و سالمونلا به عنوان عوامل بیماری های منتقله از غذا گزارش شده است [ 5 ، 6 ]. یکی از مهم‌ترین پاتوژن‌های غذایی روان‌گردان مربوط به فرآورده‌های گوشتی پخته شده با بسته‌بندی بی‌هوازی و خرابی‌های ماندگاری غذاهای کنسرو شده، لیستریا مونوسیتوژنز است . این ارگانیسم عامل بیماری لیستریوز است، بیماری که می تواند جدی باشد و اغلب در افراد مستعد کشنده است که ناشی از خوردن غذای آلوده است [ 7 ]. بنابراین، برای جلوگیری از آلودگی در طول تولید، فروش و توزیع و افزایش زمان ماندگاری مواد غذایی خام و/یا فرآوری شده، باید از افزودنی های مصنوعی استفاده شود. با این حال، یک بحث قوی در مورد جنبه های ایمنی این نگهدارنده های شیمیایی وجود دارد، زیرا آنها مسئول بسیاری از ویژگی های سرطان زا و تراتوژنیک و همچنین سمیت باقی مانده هستند [ 8 ]. بنابراین، توجه روزافزونی به ترکیبات مشتق شده از گیاهان و گیاهان به عنوان جایگزینی جدید برای جلوگیری از تکثیر میکروارگانیسم ها و محافظت از مواد غذایی در برابر اکسیداسیون معطوف شده است. به طور کلی، اطلاعات کمی در مورد اثر ضد میکروبی in vivo اسانس‌های گیاهی در برابر پاتوژن‌های منتقله از غذا در گوشت وجود دارد. تا جایی که ما می دانیم، فعالیت ضد میکروبی اسانس لیمو مرکبات ( Cl EO) در برابر طیف وسیعی از میکروارگانیسم های مرتبط با غذا (باکتری ها، کپک ها و مخمرها) مورد مطالعه قرار نگرفته است. هدف از کار حاضر (1) ارزیابی ترکیب شیمیایی EO لیمو تونس ( Cl EO) توسط GC-MS، (2) مطالعه در شرایط آزمایشگاهی فعالیت‌های آنتی اکسیدانی و ضد میکروبی Cl EO، (iii) برای ارزیابی اثر Cl EO بر فیزیکوشیمیایی گوشت چرخ کرده خام گاو ذخیره شده در دمای 4 درجه سانتی گراد، و (IV) برای تعیین اثربخشی کلر EO در مهار رشد L. monocytogenes در گوشت چرخ کرده خام گاو در طول نگهداری در یخچال.

مواد شیمیایی

تمام مواد شیمیایی مورد استفاده از درجه معرف تجزیه ای بودند. تمام معرف ها از سیگما آلدریچ فلوکا (سنت کوئنتین فرانسه) خریداری شدند.

مجموعه مواد گیاهی

گلهای لیمو مرکبات در اوایل آوریل 2015 با دست از Cap Bon تونس، دقیقاً در اطراف Nabeul در ارتفاع 5 متری و طول جغرافیایی 1044 جمع آوری شد. در مریخ 2015، میانگین بارندگی نابول 31 میلی متر، میانگین دما 20.5 درجه سانتی گراد و رطوبت 79 درصد بود (NIM-موسسه ملی هواشناسی-تونس، 2015). سپس شناسایی گیاه شناسی لیمو مرکبات توسط پروفسور فرجنی بن عبدالله، گیاه شناس دانشکده علوم اسفاکس، تونس انجام شد.

استخراج اسانس

استخراج روغن از 1 کیلوگرم گیاه تازه با تقطیر با بخار آب در طول 3 ساعت و با استفاده از دستگاه کلونجر [ 9 ] به دست آمد. فاز آبی با دی کلرومتان (3×50 میلی لیتر) استخراج شد و با سولفات سدیم بی آب خشک شد (PubChem CID: 24243). پس از فیلتراسیون، حلال با تقطیر فشار کاهش یافته در اواپراتور دوار حذف می شود و روغن خالص تا آغاز آنالیز کلر EO در دمای 4 درجه سانتیگراد در ابهام نگهداری می شود. مقدار روغن به دست آمده از هر ماده گیاهی به صورت زیر محاسبه شد:

روغن (% v / w ) = حجم مشاهده شده روغن (ml) / وزن نمونه (گرم) × 100.

کلر EO در N- هگزان (PubChem CID: 8058) برای کروماتوگرافی گازی و تجزیه و تحلیل طیف سنجی جرمی حل شد .

سنجش تست آنتی اکسیدانی

فعالیت مهار رادیکال DPPH

فعالیت مهار رادیکال فراکسیون های مختلف با استفاده از رادیکال DPPH به عنوان یک معرف بر اساس روش کربی و اشمیت با برخی تغییرات [ 10 ] تعیین شد. به طور خلاصه، 1 میلی لیتر از محلول 4 درصد ( وزن / حجم ) از رادیکال DPPH در اتانول (PubChem CID: 702) با 500 میکرولیتر از محلول های نمونه (غلظت های مختلف) مخلوط شد. مخلوط به مدت 20 دقیقه در تاریکی در دمای اتاق انکوبه شد. ظرفیت مهار به روش اسپکتروفتومتری با نظارت بر کاهش جذب در طول موج 517 نانومتر خوانده شد. جذب کمتر مخلوط واکنش نشان دهنده فعالیت بیشتر مهار رادیکال های آزاد است. اسید اسکوربیک به عنوان استاندارد استفاده شد. فعالیت مهار رادیکال DPPH (%) طبق فرمول محاسبه شد: فعالیت مهار رادیکال DPPH (%) = [(OD _blank  - OD _نمونه )/OD _blank ] × 100.

OD _blank جذب واکنش کنترل است که شامل همه معرف ها به جز ترکیب آزمایش شده است. _نمونه OD میزان جذب ترکیب مورد آزمایش است. غلظت عصاره با مهار 50 درصدی (IC50 ₎ از نمودار نمودار درصد بازداری در برابر غلظت عصاره محاسبه شد. آزمایشات در سه تکرار انجام شد.

سنجش بلیچینگ بتاکاروتن

فعالیت آنتی اکسیدانی با توجه به روش سفیدکننده بتاکاروتن که توسط پرات [ 11 ] توصیف شد، تعیین شد. محلول ذخیره ای از مخلوط β-کاروتن/لینولئیک اسید به شرح زیر تهیه شد: 0.5 میلی گرم بتاکاروتن (PubChem CID: 5280489) در 1 میلی لیتر کلروفرم (PubChem CID: 6212) با 25 میکرولیتر اسید لینولئیک (PubChem CID) حل شد. : 5,280,450) و 200 میلی گرم Tween-20 (PubChem CID: 443,314). کلروفرم با استفاده از اواپراتور خلاء به طور کامل تبخیر شد. سپس 100 میلی لیتر آب مقطر اشباع شده با اکسیژن (30 دقیقه) به آن اضافه شد و محلول به دست آمده به شدت تکان داده شد. چهار میلی لیتر از این مخلوط واکنش در لوله های آزمایش توزیع شد و 200 میکرولیتر از هر نمونه تهیه شده در غلظت های مختلف به آن اضافه شد. سیستم امولسیون به مدت 2 ساعت در دمای 50 درجه سانتی گراد انکوبه شد. همین روش با هیدوکسی تولوئن بوتیله (BHT) به عنوان کنترل مثبت و خالی به عنوان شاهد منفی تکرار شد. پس از این دوره انکوباسیون، جذب هر مخلوط در طول موج 490 نانومتر اندازه گیری شد. فعالیت آنتی اکسیدانی در مدل سفیدکننده بتاکاروتن در درصد (A%) با معادله زیر محاسبه شد: A% = 1 - (A ₀ ^- _A  t _/ A ^' ₀ -A't ) × 100، که در آن A ₀ و A' ₀ به ترتیب جذب نمونه و بلانک هستند که در زمان صفر اندازه گیری می شوند و A _t و A't به ترتیب جذب نمونه و بلانک هستند که پس از 2 ساعت اندازه گیری می شوند _. تمام آزمایشات در سه تکرار انجام شد.

فعالیت ضد میکروبی

میکروارگانیسم ها و شرایط رشد

کشت خالص اصیل باکتری ها و قارچ ها از مجموعه های کشت بین المللی به دست آمد: مجموعه کشت نوع آمریکایی (ATCC) و مجموعه فرهنگ محلی مرکز بیوتکنولوژی اسفاکس، تونس. آنها شامل باکتری های گرم مثبت: باسیلوس سوبتیلیس ATCC 6633 ، باسیلوس سرئوس ATCC 14579 ، استافیلوکوکوس اورئوس ATCC 25923 ، استافیلوکوکوس اپیدرمیدیس ATCC 12228 ، انتروکوکوس فکالیس 2919 و انتروکوکوس فکالیس ATCC219 و انتروکوکوس فکالیس ATCC219 و باکتری منفی: سالمونلا انتریکا ATCC 43972 ، اشریشیا کلی ATCC 25922 و سودوموناس آئروژینوزا ATCC 9027.

سویه های قارچی زیر نیز مورد آزمایش قرار گرفتند: Aspergillus niger CTM 10099 ، Aspergillus flavus (ایزوله غذایی) ، Aspergillus nidulans (ایزوله غذایی)، Aspergillus fumigatus (ایزوله غذایی) ، Fusarium graminearum ( ISPAVE 271Moxmorium ) ISPAVE 21w) و Alternaria alternata (CTM 10230) . سویه های باکتریایی روی مولر هینتون براث (Bio-Rad، فرانسه) در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 12 تا 14 ساعت در حالی که دکستروز آگار سیب زمینی (PDA) (1.5٪ آگار) در دمای 28 درجه سانتیگراد به مدت 4 روز برای قارچ ها استفاده شد. تلقیح از یک کشت آبگوشت یک شبه با رقیق شدن آنها در محلول نمکی به تقریباً 107 ^واحد تشکیل دهنده کلنی (CFU)/ml برای باکتری ها و 105 ^هاگ در میلی لیتر برای قارچ تهیه شد.

روش انتشار آگار

آزمایش‌های ضد باکتریایی و ضد قارچی با روش انتشار چاه آگار همانطور که توسط Tagg و McGiven [ 12 ] توصیف شد و روش میکرورقیق‌سازی براث با استفاده از محیط‌های استریل Mueller-Hinton (Bio-Rad، فرانسه) برای سویه‌های باکتریایی و دکستروز آگار سیب‌زمینی (Bio-Rad، فرانسه) انجام شد. ) برای آزمایشات ضد قارچ. 15 میلی لیتر از آگار مذاب (45 درجه سانتیگراد) در پتری ظروف استریل (Ø90 میلی متر) ریخته شد. سوسپانسیون های سلولی آماده شد و 100 میکرولیتر به طور مساوی روی سطح صفحات آگار مولر-هینتون آگار (Oxoid Ltd.، UK) برای باکتری ها یا محیط دکستروز آگار سیب زمینی (Oxoid Ltd.، UK) برای قارچ ها پخش شد. هنگامی که صفحات به صورت آسپتیک خشک شدند، چاه های 06 میلی متری با یک پیپت پاستور استریل به داخل آگار پانچ شدند. کلر EO در دی متیل سولفوکسید (DMSO) / آب (1/1) و آب استریل تا غلظت نهایی 50 میلی گرم در میلی لیتر حل شد. بنابراین، 50 میکرولیتر در چاهک ها قرار داده شد و پلیت ها در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت برای سویه های باکتریایی و 72 ساعت برای قارچ ها در دمای 28 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. جنتامایسین (10 میکروگرم در چاهک)، آمفوتریسین B (PubChem CID: 5280965) در 20 میکروگرم در چاهک و DMSO به عنوان کنترل مثبت و منفی خدمت کردند. فعالیت ضد میکروبی با اندازه‌گیری قطر نواحی مهار دایره‌ای در اطراف چاه ارزیابی شد. آزمایشات در سه تکرار انجام شد.

تعیین MIC و MFC

حداقل غلظت مهاری (MICs) کلر EO بر اساس گولوس و همکاران تعیین شد. [ 13 ] در برابر پانلی از 21 میکروارگانیسم که گونه‌های مختلف اکوسیستم‌های مختلف را نشان می‌دهند. آزمایش در میکروپلیت های استریل 96 چاهی با حجم نهایی در هر چاه میکروپلیت 100 میکرولیتر انجام شد. محلول ذخیره ای از کلر EO (50 میلی گرم بر میلی لیتر) در DMSO/آب (9/1) تهیه شد. فعالیت بازدارندگی کلر EO به درستی تهیه و به هر چاهک منتقل شد تا رقت سریال دو برابری از نمونه اصلی به دست آید و محدوده غلظت 0.039-10 mg/ml تولید شود. به هر چاه آزمایشی 10 میکرولیتر سوسپانسیون سلولی به غلظت نهایی تلقیح 106 ^CFU  /ml برای باکتری ها و 105 ^هاگ در میلی لیتر برای قارچ اضافه شد. چاه های کنترل رشد مثبت فقط در محیط مناسب خود از باکتری یا قارچ تشکیل شده بودند. DMSO/آب (1/9) (PubChem CID: 679) به عنوان کنترل منفی استفاده شد. سپس پلیت ها با پوشش های پلیت استریل پوشانده شدند و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 24 ساعت برای سویه های باکتریایی و 72 ساعت برای قارچ ها در دمای 28 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. MIC به عنوان کمترین غلظت کل اسانس که در آن میکروارگانیسم رشد قابل مشاهده پس از انکوباسیون را نشان نمی دهد، تعریف شد. به عنوان شاخص رشد میکروارگانیسم، 25 میکرولیتر تیازولیل بلو تترازولیوم بروماید (PubChem CID: 64,965) (MTT)، محلول نشانگر (0.5 میلی گرم در میلی لیتر) محلول در آب استریل به چاه ها اضافه شد و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. . نمک تترازولیوم بی رنگ به عنوان یک گیرنده الکترون عمل می کند و توسط موجودات بیولوژیکی فعال به یک محصول فورمازان قرمز رنگ تبدیل می شود. در جایی که رشد میکروبی مهار شد، محلول در چاه پس از انکوباسیون با MTT شفاف باقی ماند. حداقل غلظت قارچ کش (MFCs) با زیر کشت 10 میکرولیتری در صفحات دکستروز آگار سیب زمینی (PDA) تعیین شد و به مدت 72 ساعت در دمای 28 درجه سانتی گراد انکوبه شد. کمترین غلظت بدون رشد قابل مشاهده به عنوان MFC تعریف شد، که نشان دهنده ≥99.5٪ از بین رفتن تلقیح اصلی است. DMSO و اتانول به عنوان کنترل منفی استفاده شد. تعیین مقادیر MIC و MFC در سه تکرار انجام شد.

اثر درجا Cl EO

اثربخشی در محل کلر EO در برابر L. monocytogenes در مدل گوشت چرخ کرده مطابق روشی که توسط Ben Hsouna و همکارانش توضیح داده شده است، ارزیابی شد . [ 5 ] و Careaga و همکاران. [ 14 ] با تغییرات جزئی. به طور خلاصه، یک کشت کار تازه از L. monocytogenes حاوی حدود 106 ^CFU  /ml با تعلیق 3-5 کلنی جدا شده در 10 میلی لیتر براث مولر-هینتون (MH) تهیه شد و یک شبه در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت کشت داده شد تا به دست آید. فاز ثابت ماهیچه های گوشت گاو بدون چربی تازه پس از سفت شدن از یک کشتارگاه در اسفاکس-تونس به دست آمد و در جعبه های پلی استایرن عایق شده روی یخ ظرف 1 ساعت پس از فرآیند خرد کردن به آزمایشگاه منتقل شد. یک حیوان سالم و تازه ذبح شده ماهیچه اش عقیم است [ 15 ]. به منظور کاهش تعداد میکروارگانیسم های چسبیده به سطح ماهیچه گاو، هر قطعه به مدت 5 دقیقه در آب جوش غوطه ور شد. سطح پخته شده عضله با چاقوهای استریل در شرایط آسپتیک حذف شد. تکه‌های گوشت آماده‌شده به شرح بالا در چرخ استریل چرخ‌کرده و قسمت‌های 0.1 ± 25 گرم در کیسه‌هایی قرار داده شد. نیمی از نمونه های گوشت با 2 × 10 ²  CFU از L. monocytogenes / گرم گوشت تلقیح شدند و به طور همگن به مدت 3 دقیقه در دمای اتاق مخلوط شدند تا از توزیع مناسب پاتوژن اطمینان حاصل شود. قبل از تلقیح نیمه دوم گوشت، کلر EO در 10٪ DMSO حل شد، از طریق فیلترهای پلی کربنات سیاه با اندازه منافذ 0.22 میکرومتر (Millipore) فیلتر شد و سپس دو غلظت 2MIC و 3MIC مربوط به 0.06 و 0.312 میلی گرم کلر به آن اضافه شد. EO/g گوشت، به ترتیب؛ و مخلوط می شود تا میکروارگانیسم ها به طور مساوی توزیع شوند. تمامی کیسه های حاوی نمونه های گوشت در دمای 7 درجه سانتی گراد نگهداری و در روزهای 0، 2، 4، 6، 8 و 10 نگهداری از نظر شمارش L. monocytogenes مورد بررسی قرار گرفتند . پس از فواصل از پیش تعیین شده، جداسازی L. monocytogenes با برداشتن قطعات به صورت آسپتیک و ترکیب با 250 میلی لیتر MH انجام شد. نمونه ها به مدت 1 دقیقه همگن شدند و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 6 ساعت انکوبه شدند. از این پیش غنی سازی (برای احیای سلول های زنده آسیب دیده احتمالی)، باقی مانده L. monocytogenes با روش شمارش کلونی صفحه تعیین شد. پس از تکنیک رقت دهی سریال با محلول فیزیولوژیکی فیزیولوژیکی، 100 میکرولیتر از هر نمونه بر روی سطوح محیط کشت مولر هینتون آگار پخش شد و سپس در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوباسیون شد. آب شور استریل به جای کلر EO در کنترل تیمار نشده اضافه شد ، با باکتری های مورد آزمایش تلقیح شد و تحت شرایط مشابه سایر نمونه ها نگهداری شد. سه تکرار جداگانه از هر آزمایش، در همه موارد انجام شد.

آماده سازی نمونه

گوشت گاو خام توسط یک تامین کننده محلی (کشتارگاه اسفاکس، تونس) تهیه شده است. آنها در جعبه های پلی استایرن عایق شده روی یخ قرار گرفتند و ظرف 1 ساعت پس از کشتار به آزمایشگاه منتقل شدند. گوشت گاو خام با چرخ کردن در چرخ استریل به صورت خام چرخ می شد. در مورد تهویه‌سازی گوشت چرخ‌کرده گاو خام برای نگهداری در دمای 4 درجه سانتی‌گراد، پنج قسمت مساوی (C، T1-T4): C (شاهد)، T1 ₍ Cl EO : 0.06%)، T2 ₍ Cl EO : 0.312%). ، T ₃ (BHT در 0.01٪)، T ₄ ( Cl EO 0.312٪ و BHT در 0.01٪). برای هر آزمایش، تمام آزمایش‌ها روی یک دسته از گوشت چرخ‌کرده گاو خام اعمال شد. هر فرمول یک مخلوط همگن تولید می کند که در خلاء داخل محفظه های پلاستیکی قرار می گیرد تا سه "تکرار" تولید شود.

نمونه های گوشت به مدت 10 روز در دمای 4 درجه سانتیگراد نگهداری شدند و از نظر pH و TBARS آنالیز شدند.

تعیین pH

pH برای مخلوط های همگن گوشت با آب مقطر با استفاده از نسبت 1:10 w / v [ 16 ] تعیین شد. بخش 5 گرمی نمونه در 50 میلی لیتر آب مقطر (PH 7.00) همگن شده و مخلوط فیلتر شد. pH فیلتر با استفاده از PH متر (pH 210 ریزپردازنده pH متر، ابزار HANNA، آلمان) در هر نقطه نمونه برداری اندازه گیری شد.

ارزش مواد واکنش دهنده اسید تیوباربیتوریک (TBARS).

TBARS با توجه به روش Eymard و همکاران تعیین شد. [ 17 ]. دو گرم نمونه با 100 میکرولیتر BHT (PubChem CID: 31404) در اتانول (1 گرم در لیتر) و 16 میلی لیتر تری کلرواستیک اسید (TCA 50 گرم در لیتر) (PubChem CID: 6421) مخلوط شد. نمونه ها توسط مخلوط کن آشپزخانه به مدت 10 دقیقه همگن شدند و سپس فیلتر شدند. دو میلی لیتر فیلتر (یا 2 میلی لیتر TCA برای بلانک) به 2 میلی لیتر محلول تیوباربیتوریک اسید (PubChem CID: 2,723,628) (20 mol/l) اضافه شد. لوله های محکم بسته شده در دمای 70 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه گرم شده و به سرعت در یخ سرد می شوند. با اسپکتروفتومتر (طیف‌فتومتر مرئی T 60UV، ابزارهای PG) میزان جذب در برابر نقطه خالی در 508 (A508nm)، 532 (A532nm) و 600 (A600nm) قرائت شد. جذب اندازه گیری شده در حداکثر (A532 نانومتر) برای رانش خط پایه به شرح زیر اصلاح شد: A532 نانومتر تصحیح = A532 نانومتر - [((A508 نانومتر - A600 نانومتر) × (600 - 532))/(600/508)] - A600 نانومتر نتایج به عنوان معادل میلی گرم مالون آلدئید (MDA) به ازای هر کیلوگرم نمونه (mg/kg) با استفاده از ضریب خاموشی مولی ماده افزایشی MDA-TBA در 532 نانومتر (1.56 × 105 M - 1 cm-1) با توجه به Buege و Aust بیان شد. [ 18 ]. MDA با استفاده از فرمول زیر تعیین شد.

کروماتوگرافی گازی - طیف سنجی جرمی (GC-MS)

تجزیه و تحلیل اسانس بر روی یک MSD بی اثر GC-MS HP مدل 6980 (Agilent Technologies، J&W Scientific Products، Palo Alto، CA، USA)، مجهز به ستون مویرگی Agilent Technologies (طول 60 متر؛ 0.25) انجام شد. شناسه میلی متر؛ ضخامت فیلم 0.25 میلی متر)، و به یک آشکارساز انتخابی جرم (MSD5973، ولتاژ یونیزاسیون 70 eV؛ همه Agilent، سانتا کلارا، کالیفرنیا) جفت شد. گاز حامل هلیم بود و با سرعت جریان 1.2 میلی لیتر در دقیقه استفاده شد. برنامه دمای فر به شرح زیر بود: 1 دقیقه در 100 درجه سانتیگراد از 100 به 280 درجه سانتیگراد در 5 درجه سانتیگراد در دقیقه ^-1 و 25 دقیقه در 280 درجه سانتیگراد افزایش یافت. کروماتوگراف مجهز به انژکتور اسپلیت/تقسیم کمتری بود که در حالت تقسیم کمتر استفاده می‌شد. نسبت نسبی هر جزء به عنوان درصد به‌دست‌آمده از نرمال‌سازی منطقه پیک بیان شد، و همه عوامل پاسخ نسبی به عنوان یک در نظر گرفته شدند. شاخص‌های کواتس آنها با استفاده از یک سری همولوگ از آلکان‌های _C10 - _C22 n- تزریق شده در شرایط یکسان محاسبه شد . شناسایی مولفه‌ها با تطبیق طیف‌های جرمی آنها با Wiley Registry of Mass Spectral Data ویرایش هفتم (Agilent Technologies, Inc.) و داده‌های کتابخانه موسسه ملی استاندارد و فناوری 05 MS (NIST) اختصاص داده شد. شناسایی‌ها نیز با مقایسه شاخص‌های حفظ کوواتز با کتابخانه‌های مرجع خصوصی و از ادبیات انجام شد.

تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل واریانس یک طرفه (ANOVA) و آزمون تعقیبی ترکیه برای تعیین تفاوت معنی دار بین تیمارها با استفاده از بسته آماری SPSS 19 (SPSS Ltd., Woking, UK) انجام شد. داده های میکروبیولوژیکی به لگاریتم تعداد واحدهای تشکیل دهنده کلنی (CFU/g) تبدیل و تحت آنالیز واریانس قرار گرفتند. میانگین و خطاهای استاندارد محاسبه شد. تفاوت بین مقادیر میانگین تیمارهای مختلف با آزمون کمترین اختلاف معنی‌دار تعیین شد. سطح احتمال P  <0.05 در آزمون معنی‌داری آماری همه داده‌های تجربی استفاده شد. میانگین تفاوت ها با روش کمترین تفاوت معنی دار (LSD) از هم جدا شدند.

ترکیب شیمیایی اسانس

اسانس حاصل از تقطیر با آب از گلهای تازه گیاه C. limon دارای رنگ زرد روشن بود. بازده روغن 3 درصد (حجم/وزن تازه) بود. کلر EO توسط GC -MS آنالیز شد. 21 جزء مختلف در EO لیمو مرکبات شناسایی شد . اجزای شناسایی شده با درصدهای نسبی و زمان ماند آنها در جدول 1 آورده شده است . آنالیزها مخلوط پیچیده ای از کلر EO را نشان دادند که عمدتاً از مونوترپن هیدروکربن، مونوترپن اکسیژن دار و ترکیبات نیتروژن تشکیل شده است. نه جزء اصلی شناسایی شده عبارتند از: β-پینن (25.44٪)، لیمونن (39.74٪)، لینالول (2.16٪)، α-ترپینئول (7.30٪)، لینالیل استات (3.01٪)، استات ژرانیل (3.03٪) نرولیدول (91/6 درصد)، استات نیریل (74/1 درصد) و فارنسول (28/4 درصد). اجزای فرعی (کمتر از 1٪) شناسایی شدند: α-پینن (0.46٪)، سابینن (0.44٪)، میرسن (0.36٪)، 1،8-cineol (0.54٪)، سیس-لینالول اکسید (0.53٪) و Geranial (0.43%). در آزمایش ما، کلر EO جدا شده از نمونه های لیمو تونس حاوی چهار ماده غالب فوق الذکر با درصدهای مختلف است. از سوی دیگر احمد و همکاران. [ 19 ] گزارش داد که لیمونن نیز ماده شیمیایی اصلی در روغن هند است. با این حال، نتایج ما درصد متفاوتی از نتایج گزارش شده بود. از آزمایش ما مشاهده کردیم که درصد ترکیب شیمیایی و مواد غالب ثابت نبود. درصد مواد موثره در اسانس نمونه های طبیعی به توزیع جغرافیایی و همچنین شرایط محیطی مانند دما، بارندگی، ارتفاع، ساعات آفتابی و غیره بستگی دارد [ 20 ]. از سوی دیگر، فعالیت هایی مانند فعالیت های بیولوژیکی و شیمیایی همیشه به مواد فعال موجود در روغن بستگی دارد [ 21 ]. ماده فعالی مانند لیمونن، α-پینن، بتا-پینن و بتا-میرسن در صنعت عطرسازی، طعم دهنده ها و داروها به عنوان یک ضد عفونی کننده و بی حس کننده موضعی استفاده می شود [ 22 ].

جدول 1 ترکیب شیمیایی اسانس جدا شده با تقطیر با آب از گلهای Cl EO

فعالیت های آنتی اکسیدانی

گیاهان با خاصیت مهار رادیکال و ظرفیت آنتی اکسیدانی برای کاربردهای دارویی و به عنوان افزودنی غذایی مفید هستند. بنابراین، در مطالعه حاضر ظرفیت آنتی اکسیدانی کلر EO با استفاده از روش مهار رادیکال DPPH با مقایسه با فعالیت اسید اسکوربیک به عنوان یک آنتی اکسیدان شناخته شده ارزیابی شد. هدف آزمایش DPPH اندازه‌گیری ظرفیت اسانس برای از بین بردن رادیکال آزاد پایدار DPPH است ^. با اهدای اتم هیدروژن یا یک الکترون [ 23 ]. اگر عصاره ها ظرفیت حذف رادیکال آزاد DPPH را داشته باشند، محلول آبی/بنفش اولیه به دلیل تشکیل دی فنیل پیکریل هیدرازین به رنگ زرد تغییر می کند. اثر کلر EO متفاوت بر مهار رادیکال DPPH با اسید اسکوربیک مقایسه شد که به عنوان کنترل مثبت استفاده شد و با تعیین مقادیر IC50 قدردانی _شد . همانطور که در شکل 1 نشان داده شده است ، تست DPPH نشان داد که فعالیت مهار رادیکال های آزاد به روشی وابسته به دوز است. از تجزیه و تحلیل شکل 1 ، می‌توان نتیجه گرفت که فعالیت حذف رادیکال کلر EO و کنترل‌های مثبت اسید اسکوربیک با افزایش غلظت افزایش یافت ( 05/0 P <). مطالعه حاضر نشان داد که کلر EO در مقایسه با اسید آسکوربیک استاندارد، یک فعالیت مهار رادیکال قوی از خود نشان داد.

عکس. 1

 

اثر پاک کننده کلر EO در غلظت های مختلف 5، 10، 25، 50 و 100 میکروگرم بر میلی لیتر، بر رادیکال پایدار 1،1-دی فنیل-2-پیکریل هیدرازیل (DPPH). نتایج به صورت درصد کاهش جذب در طول موج 517 نانومتر نسبت به شاهد بیان می‌شوند. اسید اسکوربیک به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. هر مقدار نشان دهنده میانگین ± SD سه آزمایش است

اثر بازدارندگی غلظت‌های مختلف کلر EO بر پراکسیداسیون لیپیدی با آزمایش سفیدکننده بتاکاروتن/لینولئیک اسید تعیین شد. شکل 2 درجات مختلفی از اکسیداسیون اسید لینولئیک و متعاقبا سفید شدن بتاکاروتن را پس از افزودن کلر EO و BHT به عنوان کنترل مثبت در غلظت های مختلف نشان می دهد. این فعالیت آنتی اکسیدانی کلر EO با افزایش غلظت افزایش یافت ( P <0.05). نتایج کلی بهتر از نتایج ارائه شده توسط فعالیت رادیکال زدایی بود (شکل 1 و 2 ). در واقع، Cl EO توانایی مهار DPPH عالی با EC ₅₀ 15.056 میکروگرم بر میلی لیتر و مهار سفیدکننده قوی β-کاروتن را پس از 120 دقیقه انکوباسیون با EC ₅₀ 40.147 میکروگرم بر میلی لیتر نشان داد (شکل های 1 و 2 ). مهار پراکسیداسیون لیپیدی با افزودن کلر EO می تواند برای بهبود کیفیت و پایداری محصولات غذایی مورد استفاده قرار گیرد. Cl EO توانست رادیکال های پراکسید را خاموش کند و واکنش زنجیره ای پراکسیداسیون را خاتمه دهد.

شکل 2

 

فعالیت آنتی اکسیدانی کلر EO در غلظت‌های مختلف 5، 50 و 100 میکروگرم بر میلی‌لیتر با روش سفیدکننده بتاکاروتن اندازه‌گیری شد. BHT به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. مقادیر میانگین ± SD هستند ( n  = 3)

فعالیت آنتی اکسیدانی ممکن است به حضور همان اجزای شیمیایی نسبت داده شود. مونوترپن های موجود در این اسانس ممکن است به عنوان عوامل مهار کننده رادیکال عمل کنند. به نظر می رسد که یک روند کلی است که اسانس های حاوی هیدروکربن های مونوترپن، مونوترپن های اکسیژن دار و/یا سسکوی ترپن ها دارای خواص آنتی اکسیدانی بیشتری هستند [ 24 ، 25 ، 26 ]. این فعالیت ها ممکن است به حضور 1،8-سینئول، α-پینن، β-پینن و لیمونن موجود در اسانس C. limon نسبت داده شود. اسانس ها مخلوط های کاملاً پیچیده ای هستند که از چندین ده جزء تشکیل شده اند و این پیچیدگی اغلب توضیح الگوی فعالیت را دشوار می کند. به همین دلیل، بسیاری از گزارش ها در مورد پتانسیل آنتی اکسیدانی اسانس ها اغلب به مفاهیمی مانند هم افزایی، تضاد و افزایش اشاره دارند.

هیدروکربن های مونوترپن؛ به خصوص ترپینولن، α- و γ-ترپینن نیز می تواند برای فعالیت آنتی اکسیدانی مشاهده شده در نظر گرفته شود، اما بدیهی است که هیچ کدام قوی تر از مونوترپن های اکسیژن دار نیستند. وجود گروه های متیلن قویاً فعال شده در این مولکول ها احتمالاً دلیل این رفتار است. از سوی دیگر، هیدروکربن های سسکوی ترپن ها و مشتقات اکسیژن دار آن ها دارای فعالیت آنتی اکسیدانی بسیار پایینی هستند [ 27 ]. یافته های بالا وجود خاصیت آنتی اکسیدانی طبیعی را در Cl EO نشان داد که بهتر از BHT، یک عامل آنتی اکسیدانی مصنوعی بسیار کارآمد است که به طور گسترده در فناوری مواد غذایی استفاده می شود. اساساً، علاقه به تحقیق در مورد آنتی اکسیدان های طبیعی برای استفاده در غذاها یا مواد دارویی به عنوان جایگزینی برای آنتی اکسیدان های مصنوعی، که به دلیل سمیت احتمالی آنها محدود شده اند، به طور قابل توجهی افزایش یافته است [ 28 ، 29 ].

فعالیت های ضد میکروبی

فعالیت ضد باکتریایی اسانس C. limon در برابر گرم مثبت ( B. cereus، E. faecalis، S. aureus، S. اپیدرمیس، B. subtilis، L. monocytogenes و M. luteus ) و گرم منفی ( P. باکتری های آئروژینوزا، E.coli، S. enteritidis و K. pneumoniae ). فعالیت ضد باکتریایی با ارزیابی ناحیه مهار (IZ) و تعیین مقادیر MIC مورد ارزیابی قرار گرفت. همانطور که در جدول 2 مشاهده می شود ، Cl EO درجات مختلفی از فعالیت ضد باکتریایی را در برابر همه سویه های آزمایش شده نشان داد. مناطق مهار در محدوده 13-26 میلی متر بودند. در میان باکتری های گرم مثبت، بیشترین ناحیه مهاری در برابر L. monocytogenes (26 میلی متر) و به دنبال B. Cereus (24 mm) و S. aureus (22 mm) مشاهده شد . در ميان گرم منفي، بيشترين ناحيه بازدارنده در برابر S. enteritidis (18 ميلي متر) مشاهده شد . منطقه مهار جنتامایسین (10 میکروگرم در چاه)، که به عنوان کنترل مثبت برای باکتری ها استفاده شد، از 12 تا 25 میلی متر متغیر بود. کنترل منفی هیچ اثر بازدارنده ای در برابر باکتری های مورد آزمایش نشان نداد.

جدول 2 فعالیت ضد باکتریایی Cl EO در برابر مواد غذایی، باکتری های فاسد کننده و تعیین حداقل غلظت مهاری (MICs) بیان شده بر حسب میلی گرم بر میلی لیتر

اکثر مطالعاتی که به بررسی عملکرد روغن‌های ضروری علیه ارگانیسم‌های فاسدکننده غذا و پاتوژن‌های منتقله از غذا می‌پردازند، موافق هستند که، به طور کلی، اسانس‌ها در برابر باکتری‌های گرم مثبت کمی فعال‌تر از باکتری‌های گرم منفی هستند [ 30 ، 31 ، 32 ، 33 ]. شاید بتوان انتظار داشت که ارگانیسم های گرم منفی کمتر مستعد عمل ضد باکتری ها هستند، زیرا آنها دارای غشای بیرونی اطراف دیواره سلولی هستند که انتشار ترکیبات آبگریز را از طریق پوشش لیپوپلی ساکارید آن محدود می کند. با این حال، نتایج ما نشان می‌دهد که باکتری‌های گرم مثبت به روغن مورد بررسی حساس‌تر هستند و دامنه آن بین 0.039 تا 1.25 میلی‌گرم در میلی‌لیتر نسبت به باکتری‌های گرم منفی در محدوده 0.625 تا 2.5 میلی‌گرم در میلی‌لیتر است که تایید و توسعه یافته است. در مطالعات حاضر از مقایسه نتایج ما با مقادیر گزارش شده در ادبیات، جالب است که روغن در محدوده غلظت به عنوان فعال ترین اسانس اثر ضد میکروبی نشان داد [ 34 ، 35 ]. اعتقاد بر این است که فعالیت ضد میکروبی اسانس‌ها با اجزای فیتوشیمیایی مرتبط است. اسانس ها اصول فرار و بدبو متابولیسم ثانویه گیاهی هستند که کاربردهای گسترده ای در صنایع طعم دهنده و نگهداری مواد غذایی دارند [ 36 ]. اخیراً برخی از محققان گزارش کرده اند که هیدروکربن های مونوترپن یا سسکوئی ترپن و مشتقات اکسیژن دار آنها که اجزای اصلی اسانس ها هستند، فعالیت های ضد میکروبی بالقوه ای از خود نشان می دهند [ 37 ]. این یافته‌ها نتایج این مطالعه را قویاً تأیید می‌کند، زیرا اسانس C. limon s نیز حاوی این ترکیبات است که کارایی آن را به عنوان یک عامل ضد میکروبی طبیعی تأیید می‌کند.

فعالیت ضد قارچی در برابر Aspergillus sp.، Fusarium sp. و Alternaria alternata . نتایج یک اثر بازدارندگی قوی Cl EO را بر رشد A. niger و A. flavus با قطر ناحیه مهار 26 میلی‌متر و مقادیر MIC به ترتیب 0.625 و 0.312 mg/ml نشان داد (جدول 3 ). همچنین، کلر EO یک فعالیت ضد قارچی در برابر Fusarium sp نشان داد. و Aspergillus sp. که مسئول فساد بسیاری از غذاها هستند. حداکثر قطر ناحیه مهار 17-21 میلی متر و مقادیر MIC از 0.625 تا 1.25 میلی گرم در میلی لیتر بود (جدول 3 ). فعالیت ضد قارچی بالا را می توان به وجود ترکیبات شیمیایی مذکور در اسانس نسبت داد. فعالیت ضد میکروبی اسانس های C. limon ظاهراً مربوط به ترکیبات نوع ترپن آن مانند پینن، میرسن و لیمونن است (جدول 1 )، زیرا بین ساختار شیمیایی فراوان ترین روغن ها و فعالیت های ضد میکروبی آنها رابطه وجود دارد. لیمونن دارای خواص ضد قارچی قوی است [ 38 ]. اگرچه مکانیسم اثر ترپن ها به طور کامل شناخته نشده است، تصور می شود که شامل اختلال در غشاء توسط ترکیبات چربی دوست است [ 39 ]. اسانس‌های حاوی ترپن‌ها همچنین دارای فعالیت ضد میکروبی [ 40 ] هستند که با مطالعات فعلی ما مطابقت دارد.

جدول 3 فعالیت ضد قارچی Cl EO و تعیین حداقل غلظت قارچ کش (MFCs) بیان شده بر حسب mg/ml

اگرچه ترکیبات مختلف درجات مختلفی از فعالیت ضد قارچی را نشان دادند، بتا کاریوفیلن و اکسید کاریوفیلن در برابر گونه های Fusarium مورد مطالعه بسیار قارچی بودند [ 37 ]. یکی دیگر از الکل مونوترپن جزئی، لینالول، گزارش شده است که دارای طیف وسیعی از فعالیت ضد باکتریایی و ضد قارچی است [ 41 ]. اناتیومرهای α-پینن، 2-β-پینن و لیمونن دارای فعالیت ضد باکتریایی قوی هستند [ 42 ]. این اجزای شیمیایی اثرات سمی خود را علیه میکروارگانیسم های مورد مطالعه از طریق اختلال در یکپارچگی غشای باکتری ها یا قارچ اعمال می کنند [ 43 ].

علاوه بر این، شناخته شده است که فعالیت بازدارندگی یک اسانس ناشی از یک برهمکنش پیچیده بین اجزای مختلف آن است که ممکن است اثرات افزایشی، هم افزایی یا آنتاگونیستی را حتی برای آنهایی که در غلظت های پایین وجود دارند، ایجاد کند. اسانس‌ها که محصولات بدبو و فرار متابولیسم ثانویه گیاهی هستند، کاربردهای گسترده‌ای در صنایع طعم‌دهنده و نگهداری مواد غذایی دارند [ 33 ]. نتایج این مطالعه امکان استفاده از Cl EO یا برخی از اجزای آن را به عنوان نگهدارنده طبیعی مواد غذایی پیشنهاد می کند، زیرا دارای فعالیت ضد باکتریایی قوی هستند.

تجزیه و تحلیل فیزیکوشیمیایی نمونه های گوشت تیمار شده

pH

داده های ارائه شده در جدول 4 نشان دهنده تکامل pH در گوشت چرخ کرده خام گاو تیمار شده با چهار تیمار مختلف است. pH اولیه ثبت شده برای نمونه های شاهد و تیمار شده بالاتر از 5.6 بود. مقدار pH (C) از 0.26 ± 5.66 به 0.24 ± 7.0 در پایان دوره ذخیره سازی افزایش یافت. در مقایسه با نمونه شاهد، تفاوت معنی داری از نظر مقدار pH نمونه های T _1، T2 و T ₃ مشاهده نشد . از نظر آماری، این اختلاف pH  از نمونه T4 معنی‌دار شد (05/0 > _P ) . در پایان ذخیره سازی، مقادیر pH گوشت چرخ کرده خام  با افزودن مواد نگهدارنده تحت تأثیر قرار گرفت (05/0 > P ). افزایش pH ( P  <0.05) منعکس کننده درجه فساد گوشت از طریق تجزیه پروتئین برای تولید اسیدهای آمینه آزاد است که منجر به تشکیل NH ₃ و آمین ها، ترکیبات واکنش قلیایی می شود [ 44 ].

جدول 4 اثر کلر EO و ترکیب آنها با BHT بر pH و TBARS (میلی گرم معادل مالون آلدئید در هر کیلوگرم نمونه (میلی گرم بر کیلوگرم) گوشت چرخ کرده خام گاو در طول نگهداری در دمای 4 درجه سانتی گراد

TBARS

مقادیر TBARS نشان‌دهنده محتوای محصولات اکسیداسیون لیپید ثانویه، عمدتاً آلدئیدها و کربونیل‌های هیدروکربن‌ها است که باعث ایجاد بوی بد در گوشت می‌شوند [ 45 ]. در طول دوره ذخیره سازی، مقادیر TBARS در نمونه های کنترل (C) بیشتر از نمونه های تیمار شده بود (جدول 4 ). کمترین مقادیر TBARS (0.55 ± 0.12 میلی گرم مالونالدید بر کیلوگرم) با تیمار T4 پس از 10 روز به دست آمد. گزارش شده است که شاخص 2 آستانه محدود برای پذیرش گوشت گاو اکسید شده [ 46 ] در نظر گرفته شده است. این نتایج نشان داد که کلر EO/BHT (T4 ₎ عملکرد آنتی اکسیدانی بالاتری را در مقایسه با تیمارهای Cl EO (T1 _و T2 ₎ از خود نشان داد. با این حال، اثرات آنتی اکسیدانی BHT در 0.01٪ (T3 ₎ را نمی توان نادیده گرفت. علاوه بر این، نمونه های تیمار شده (T1، T2 و T3) زیر حد تشخیص باقی می مانند (جدول 4 ). عملکرد آنتی اکسیدانی مرکبات EO را می توان به محتویات فنلی موجود در برگ ها نسبت داد [ 4 ].

تجزیه و تحلیل زمان کشت: اثر Cl EO بر تعداد زنده لیستریا مونوسیتوژنز ATCC 19117

کنترل لیستریا مونوسیتوژنز در مواد غذایی به یک دغدغه اصلی در صنایع غذایی و ذخیره سازی تبدیل شده است. هدف از این آزمایش تعیین کارایی Cl EO برای سرکوب رشد لیستریا مونوسیتوژنز ATCC 19117 در گوشت چرخ کرده خام گاو در دمای 4 درجه سانتی گراد بود. بنابراین، اثر Cl EO بر لیستریا مونوسیتوژنز ATCC 19117 برای تایید اثر آن و روشن شدن مکانیسم عمل آن بررسی شد. سینتیک با استفاده از غلظت های مختلف کلر EO (2 MIC و 3MIC) انجام شد. همانطور که در شکل 3 نشان داده شده است ، در روز 0، تعداد L. monocytogenes برای همه نمونه های گوشت یکسان بود ( P  > 0.05). در طول دوره نگهداری در دمای 4 درجه سانتیگراد، تعداد L. monocytogenes در نمونه های تیمار نشده بیشتر از نمونه های تیمار شده با 0.06 و 0.312 میلی گرم کلر EO بر گرم گوشت چرخ کرده خام بود: در غلظت 2 و 3 MIC، رشد L. تعداد مونوسیتوژن ها به ترتیب پس از 4 و 6 روز نگهداری در دمای 4 درجه سانتیگراد به میزان 2.5 سیکل log کاهش یافت (شکل 3 ).

شکل 3

 

بقای مرتبط با زمان L. monocytogenes در 4 درجه سانتیگراد پس از درمان با افزایش غلظت Cl EO . باکتری‌ها در نمونه‌های گوشت چرخ‌کرده گاو با ¹⁰⁶  CFU/g گوشت تکمیل شدند . مقادیر میانگین تکرار سه نفر هستند

به همین ترتیب، زمان نگهداری اثرات قابل توجهی ( 05/0 P  <) بر رشد L. monocytogenes داشت (شکل 3 ). کلر EO در 0.06 و 0.312 میلی گرم اثر قابل توجهی ( P  <0.05) بر رشد L. monocytogenes دارد . تعداد L. monocytogenes  تا پایان آزمایش (10 روز) کمتر از مقدار قابل توجهی ( P <0.05) باقی می ماند. در واقع، افزودن Cl EO در 2 و 3 MIC می‌تواند به طور قابل‌توجهی لیستریا مونوسیتوژنز ( P  <0.05) را در طول ذخیره‌سازی گوشت چرخ کرده خام گاو در دمای 4 درجه سانتی‌گراد به تاخیر بیندازد.

در کار حاضر، خواص فیتوشیمیایی و بیولوژیکی اسانس تونس از گل‌های لیموی سیروس را گزارش کردیم . ترکیب شیمیایی Cl EO نشان داد که لیمونن و β-پینن اجزای اصلی بودند. ما همچنین، در شرایط آزمایشگاهی و درجا، کارایی Cl EO را به عنوان یک آنتی اکسیدان طبیعی و عامل ضد میکروبی نشان دادیم. در این راستا، گوشت گاو از جمله کلر EO هدف جالبی در نگهداری در یخچال است، زیرا آلودگی گوشت گاو توسط فساد مواد غذایی و عوامل بیماری‌زای منتقله از غذا یکی از مشکلات عمده پیشرفت صنایع غذایی محسوب می‌شود.

تفکیک و شناسایی ترکیبات فعال کلر EO کار آینده برای بررسی خواهد بود. بلکه چندین ویژگی دیگر از لیمو مرکبات برای کمک به ارزش گذاری بهتر این گیاه دارویی ارزشمند خواهد بود.

فرمولاسیون رایگان ساخت کلودیفایر/فرمول ابری کننده مایعات/کدر کننده آبلیمو 

 

فرمول